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單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序Drop-seq對(duì)樣本組織細(xì)胞的分析
行業(yè)新聞 2022-06-21

  單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序Drop-seq技術(shù)是一種可快速分析數(shù)千個(gè)單細(xì)胞的方法。通過(guò)此測(cè)序方法是能夠?qū)⒚總€(gè)細(xì)胞包裹在納升級(jí)的微滴中,進(jìn)行RNA雜交并產(chǎn)生MRNA轉(zhuǎn)錄,可進(jìn)一步分析MRNA轉(zhuǎn)錄的起源細(xì)胞。


  單細(xì)胞懸液測(cè)序儀


  單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序過(guò)程

  

  1、準(zhǔn)備材料  

  把細(xì)胞從樣品組織中分離出來(lái),制備細(xì)胞懸浮液,制備微珠懸浮液帶分子條形碼。

  

  2、微滴制備  

  把細(xì)胞懸浮液和微珠懸浮液泵入芯片,然后與油匯合形成單獨(dú)分散的微滴,用每個(gè)微珠將每個(gè)細(xì)胞包裹在同一個(gè)微滴中。

  

  3、RNA雜交 

  細(xì)胞組織在微滴中裂解,釋放mRNA,細(xì)胞在微珠上與分子條碼雜交。

  

  4、逆轉(zhuǎn)錄  

  為了形成mRNA逆轉(zhuǎn)錄物(STAMPS),裂解微滴,釋放mRNA雜交物,開(kāi)始逆轉(zhuǎn)錄。

  

  5、PCR擴(kuò)增  

  在核酸外切酶的作用下,切斷每個(gè)MRNA逆轉(zhuǎn)錄物,并通過(guò)PCR擴(kuò)展核酸,以擴(kuò)大基因信息。

  

  6、測(cè)序分析  

  采用各種生物信息學(xué)工具來(lái)對(duì)細(xì)胞生物進(jìn)行測(cè)序分析。

  

  液滴微流控是可快速分離微體積中的樣本,可實(shí)現(xiàn)數(shù)千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的平行高通量分析,通常每秒可產(chǎn)生1000個(gè)微滴,每個(gè)微滴體積為1nl;此外,在液滴微流控實(shí)驗(yàn)過(guò)程中是不需要使用流熒光細(xì)胞儀等高端儀器的,其實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快速、便捷。

  

  上述便是采用單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序Drop-seq對(duì)樣本組織細(xì)胞的分離過(guò)程,將其細(xì)胞在微滴中升級(jí),進(jìn)而進(jìn)行雜交轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而可分析出轉(zhuǎn)錄物的起源細(xì)胞樣本組織。


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